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實驗一：使用高倍顯微鏡觀察幾種細胞(必修一P7)

1、是低倍鏡還是高倍鏡的視野大，視野明亮?為什么?

低倍鏡的視野大，通過的光多，放大的倍數小;高倍鏡視野小，通過的光少，但放大的倍數高。

2、為什么要先用低倍鏡觀察清楚后，把要放大觀察的物像移至視野的中央，再換高倍鏡觀察?

如果直接用高倍鏡觀察，往往由于觀察的對象不在視野范圍內而找不到。因此，需要先用低倍鏡觀察清楚，并把要放大觀察的物像移至視野的中央，再換高倍鏡觀察。

3、用轉換器轉過高倍鏡后，轉動粗準焦螺旋行不行?

不行。用高倍鏡觀察，只需轉動細準焦螺旋即可。轉動粗準焦螺旋，容易壓壞玻片。

4、使用高倍鏡觀察的步驟和要點是什么?

答：(1)首先用低倍鏡觀察，找到要觀察的物像，移到視野的中央。

(2)轉動轉換器，用高倍鏡觀察，并輕輕轉動細準焦螺旋，直到看清楚材料為止。

5、總結：四個比例關系

a.鏡頭長度與放大倍數：物鏡鏡頭越長，放大倍數越大，而目鏡正好與之相反。

b.物鏡頭放大倍數與玻片距離：倍數越大(鏡頭長)距離越近。

c.放大倍數與視野亮度：放大倍數越大，視野越暗。

d.放大倍數與視野范圍：放大倍數越大，視野范圍越小。

實驗一 觀察DNA和RNA在細胞中的分布

實驗原理：DNA 綠色(甲基綠試劑)，RNA 紅色(吡羅紅試劑)

分布：真核生物DNA主要分布在細胞核中，線粒體和葉綠體內也含有少量的DNA;RNA主要分布在細胞質中。

實驗結果: 細胞核呈綠色,細胞質呈紅色.

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實驗二 物質鑒定

還原糖 + 斐林試劑～磚紅色沉淀 脂 肪 + 蘇丹III ～橘黃色 脂 肪 + 蘇丹IV～ 紅色

蛋白質 + 雙縮脲試劑 ～紫色反應

1、還原糖的檢測

(1)材料的選取：還原糖含量高，白色或近于白色，如蘋果，梨，白蘿卜。

(2)試劑：斐林試劑(甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液)，現配現用。 (3)步驟：取樣液2mL于試管中→加入剛配的斐林試劑1mL(斐林試劑甲液和乙液等量混合均勻后再加入)→水浴加熱2min左右→觀察顏色變化(白色→淺藍色→磚紅色)

2、脂肪的檢測

(1)材料的選取：含脂肪量越高的組織越好，如花生的子葉。

(2)步驟： 制作切片(切片越薄越好)將最薄的花生切片放在載玻片中央 ↓

染色(滴蘇丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴體積分數50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精) ↓

制作裝片(滴1～2滴清水于材料切片上→蓋上蓋玻片) ↓

鏡檢鑒定(顯微鏡對光→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察染成橘黃色的脂肪顆粒)

3、蛋白質的檢測

(1)試劑：雙縮脲試劑(A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液) (2)步驟：試管中加樣液2mL→加雙縮脲試劑A液1mL，搖勻→加雙縮尿試劑B液4滴，搖勻→觀察顏色變化(紫色) 考點提示：

(1)常見還原性糖與非還原性糖有哪些?

葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還原性糖;淀粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。

(2 )還原性糖植物組織取材條件?

含糖量較高、顏色為白色或近于白色，如：蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜等。

(3)研磨中為何要加石英砂?不加石英砂對實驗有何影響?

加石英砂是為了使研磨更充分。不加石英砂會使組織樣液中還原性糖減少，使鑒定時溶液顏色變化不明顯。

(4)斐林試劑甲、乙兩液的使用方法?混合的目的?

為何要現混現用? 混合后使用;產生氫氧化銅;氫氧化銅不穩定。

(5)還原性糖中加入斐林試劑后，溶液顏色變化的順序為： 淺藍色 棕色 磚紅色 (6)花生種子切片為何要薄? 只有很薄的切片，才能透光，而用于顯微鏡的觀察。

(7)轉動細準焦螺旋時，若花生切片的細胞總有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么? 切片的厚薄不均勻。

(8)脂肪鑒定中乙醇作用? 洗去浮色。

(9)雙縮脲試劑A、B兩液是否混合后用?先加A液的目的。怎樣通過對比看顏色變化? 不能混合;先加A液的目的是使溶液呈堿性;先留出一些大豆組織樣液做對比。

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實驗三 觀察葉綠體和細胞質流動

1、材料：新鮮蘚類葉、黑藻葉或菠菜葉，口腔上皮細胞臨時裝片

2、原理：葉綠體在顯微鏡下觀察，綠色,球形或橢球形。

用健那綠染液染色后的口腔上皮細胞中線粒體成藍綠色,細胞質接近無色。 知識概要：

取材 制片 低倍觀察 高倍觀察 考點提示：

(1)為什么可直接取用蘚類的小葉，而不能直接取用菠菜葉?

因為蘚類的小葉很薄，只有一層細胞組成，而菠菜葉由很多層細胞構成。

(2)取用菠菜葉的下表皮時，為何要稍帶些葉肉?

表皮細胞除保衛細胞外，一般不含葉綠體，而葉肉細胞含較多的葉綠體。

(3)怎樣加快黑藻細胞質的流動速度?最適溫度是多少? 進行光照、提高水溫、切傷部分葉片;25℃左右。

(4)對黑藻什么部位的細胞觀察，所觀察到的細胞質流動的現象最明顯?

葉脈附近的細胞。

(5)若視野中某細胞中細胞質的流動方向為順時針，則在裝片中該細胞的細胞質的實際流動方向是怎樣的?

仍為順時針。

(6)是否一般細胞的細胞質不流動，只有黑藻等少數植物的細胞質才流動? 否，活細胞的細胞質都是流動的。

(7)若觀察植物根毛細胞細胞質的流動，則對顯微鏡的視野亮度應如何調節?

視野應適當調暗一些，可用反光鏡的平面鏡來采光或縮小光圈。

(8)在強光照射下，葉綠體的向光面有何變化?葉綠體的受光面積較小有一面面向光源。

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實驗四 觀察有絲分裂

1、 材料：洋蔥根尖(蔥，蒜)

2、 2、步驟：(一)洋蔥根尖的培養 (二)裝片的制作

制作流程：解離→漂洗→染色→制片

1. 解離: 藥液: 質量分數為15%的鹽酸,體積分數為95%的酒精(1 : 1混合液). 時間: 3~5min .目的: 使組織中的細胞相互分離開來.

2. 漂洗: 用清水漂洗約10min. 目的: 洗去藥液,防止解離過度,并有利于染色.

3. 染色: 用質量濃度為0.01g / mL或0.02g / mL的龍膽紫溶液(或醋酸洋紅液)染色3~ 5min 目的: 使染色體著色,利于觀察.

4. 制片: 將根尖放在載玻片上,加一滴清水,并用鑷子把根尖弄碎,蓋上蓋玻片,在蓋玻片上再加一片載玻片. 然后用拇指輕輕地按壓載玻片. 目的: 使細胞分散開來,有利于觀察. (三)觀察

1、先在低倍鏡下找到根尖分生區細胞：細胞呈正方形，排列緊密,有的細胞正在分裂。 2、換高倍鏡下觀察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂間期。(注意各時期細胞內染色體形態和分布的特點)。其中，處于分裂間期的細胞數目最多。 考點提示：

(1)培養根尖時，為何要經常換水?

增加水中的氧氣，防止根進行無氧呼吸造成根的腐爛。

(2)培養根尖時，應選用老洋蔥還是新洋蔥?為什么?

應選用舊洋蔥，因為新洋蔥尚在休眠，不易生根。

(3)為何每條根只能用根尖?取根尖的最佳時間是何時?為何?

因為根尖分生區的細胞能進行有絲分裂;上午10時到下午2時;因為此時細胞分裂活躍。

(4)解離和壓片的目的分別是什么?壓片時為何要再加一塊載玻片?

解離是為了使細胞相互分離開來，壓片是為了使細胞相互分散開來;再加一塊載玻片是為了受力均勻，防止蓋玻片被壓破。

(5)若所觀察的組織細胞大多是破碎而不完整的，其原因是什么?

壓片時用力過大。

(6)解離過程中鹽酸的作用是什么?丙酮可代替嗎?

分解和溶解細胞間質;不能，而硝酸可代替。

(7)為何要漂洗?

洗去鹽酸便于染色。

(8)細胞中染色最深的結構是什么?

染色最深的結構是染色質或染色體。

(9)若所觀察的細胞各部分全是紫色，其原因是什么?

染液濃度過大或染色時間過長。

(10)為何要找分生區?分生區的特點是什么?能用高倍物鏡找分生區嗎?為什么?

因為在根尖只有分生區的細胞能夠進行細胞分裂;分生區的特點是：細胞呈正方形，排列緊密，有的細胞處于分裂狀態;不能用高倍鏡找分生區，因為高倍鏡所觀察的實際范圍很小，難以發現分生區。

(11)分生區細胞中，什么時期的細胞最多?為什么?

間期;因為在細胞周期中，間期時間最長。

(12)所觀察的細胞能從中期變化到后期嗎?為什么?

不能，因為所觀察的細胞都是停留在某一時期的死細胞。

(13)觀察洋蔥表皮細胞能否看到染色體?為什么?

不能，因為洋蔥表皮細胞一般不分裂。

(14)若觀察時不能看到染色體，其原因是什么?

沒有找到分生區細胞;沒有找到處于分裂期的細胞;染液過稀;染色時間過短。

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實驗五 比較酶和Fe3+的催化效率

考點提示：

(1)為何要選新鮮的肝臟?

因為在不新鮮的肝臟中，過氧化氫酶的活性會由于細菌的破壞而降低。

(2)該實驗中所用試管應選較粗的還是較細的?為什么?

應選用較粗的，因為在較細的試管中容易形成大量的氣泡，而影響衛生香的復燃。

(3)為何要選動物的肝臟組織來做實驗，其他動植物的組織的研磨液能替代嗎?

因為肝臟組織中過氧化氫酶含量較豐富;其它動植物組織也含有少量的過氧化氫酶，所以能夠替代。

(4)相同質量的塊狀肝臟和肝臟研磨液，哪一個催化效果好?為什么?

研磨液效果好;因為它增加過氧化氫酶與過氧化氫的接觸面積。

(5)滴入肝臟研磨液和氯化鐵溶液時，可否共用下個吸管?為什么?

不可共用，防止過氧化氫酶與氯化鐵混合，而影響實驗效果。

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實驗六 色素的提取和分離

1、原理：葉綠體中的色素能溶解在有機溶劑丙酮或無水乙醇??提取色素 各色素在層析液中的溶解度不同,隨層析液在濾紙上擴散速度不同??分離色素 2、步驟：

(1)提取色素 研磨 (2)制備濾紙條

(3)畫濾液細線：均勻，直，細，重復若干次 (干了之后) (4)分離色素：不能讓濾液細線觸及層析液

(5)觀察和記錄: 結果濾紙條上從上到下依次為:橙黃色(胡蘿卜素)、黃色(葉黃素)、藍綠色(葉綠素a)、黃綠色(葉綠素b). 考點提示：

(1)對葉片的要求?為何要去掉葉柄和粗的時脈?

綠色、最好是深綠色。因為葉柄和葉脈中所含色素很少。

(2)二氧化硅的作用?不加二氧化硅對實驗有何影響?

為了使研磨充分。不加二氧化硅，會使濾液和色素帶的顏色變淺。

(3)丙酮的作用?它可用什么來替代?用水能替代嗎?

溶解色素。它可用酒精等有機溶劑來代替，但不能用水來代替，因為色素不溶于水。

(4)碳酸鈣的作用?不加碳酸鈣對實驗有何影響?

保護色素，防止在研磨時葉綠體中的色素受到破壞。不加碳酸鈣，濾液會變成黃綠色或褐色。

(5)研磨為何要迅速?要充分?過濾時為何用布不用濾紙? 研磨迅速，是為了防止丙酮大量揮發;只有充分研磨，才能使大量色素溶解到丙酮中來。色素不能通過濾紙，但能通過尼龍布。

(6)濾紙條為何要剪去兩角? 防止兩側層析液擴散過快。

(7)為何不能用鋼筆或圓珠筆畫線? 因為鋼筆水或圓珠筆油中含有其它色素，會影響色素的分離結果。

(8) 濾液細線為何要直?為何要重畫幾次?

防止色素帶的重疊;增加色素量，使色素帶的顏色更深一些。

(9) 濾液細線為何不能觸到層析液?

防止色素溶解到層析液中。

(10)濾紙條上色素為何會分離?

由于不同的色素在層析液中的溶解度不同，因而它們隨層析液在濾紙條上的擴散速度就不同。

(11)色素帶最寬的是什么色素?它在層析液中的溶解度比什么色素大一些? 最寬的色素帶是葉綠素a，它的溶解度比葉綠素b大一些。

(12)濾紙條上相互間距最大的是哪兩種色素? 胡蘿卜素和葉黃素。

(13)色素帶最窄的是第幾條色素帶?為何?

第一條色素帶，因為胡蘿卜素在葉綠體的四種色素中含量最少。

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實驗七 觀察質壁分離和復原

1、條件：細胞內外溶液濃度差，活細胞，大液泡

2、材料：紫色洋蔥鱗片葉外表皮細胞(具紫色大液泡)，質量濃度0.3g/mL的蔗糖溶液，清水等。 3、步驟：制作洋蔥鱗片葉外表皮細胞臨時裝片→觀察→蓋玻片一側滴蔗糖溶液,另一側用吸水紙吸引→觀察(液泡由大到小,顏色由淺變深,原生質層與細胞壁分離)→蓋玻片一側滴清水, 另一側用吸水紙吸引→觀察(質壁分離復原)

4、結論: 細胞外溶液濃度 > 細胞內溶液濃度，細胞失水 質壁分離 細胞外溶液濃度 < 細胞內溶液濃度，細胞吸水 質壁分離復原

知識概要：制片 觀察 加液 觀察 加水 觀察

考點提示： (1)洋蔥為何要選紫色的?若紫色過淡怎么辦?

紫色的洋蔥有紫色的大液泡，便于觀察液泡的大小變化;縮小光圈，使視野變暗些。

(2)洋蔥表皮應撕還是削?為何? 表皮應撕不能削，因為削的表

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實驗八 檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(必修一P18)

一實驗原理：某些化學試劑能使生物組織中的有關有機化合物，產生特定的顏色反應。

1、可溶性還原糖(如葡萄糖、果糖、麥芽糖)與斐林試劑發生作用，可生成磚紅色的Cu 2O沉淀。

葡萄糖+ Cu ( OH ) 2 葡萄糖酸 + Cu 2O↓(磚紅色)+ H 2O，即Cu ( OH ) 2被還原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。2、脂肪可以被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃色(或被蘇丹Ⅳ染液染成紅色)。淀粉遇碘變藍色。

3、蛋白質與雙縮脲試劑發生作用，產生紫色反應。(蛋白質分子中含有很多肽鍵，在堿性NaOH溶液中能與雙縮脲試劑中的Cu2+作用，產生紫色反應。)

二 實驗材料

1、做可溶性還原性糖鑒定實驗，應選含糖高，顏色為白色的植物組織，如蘋果、梨。(因為組織的顏色較淺，易于觀察。)

2、做脂肪的鑒定實驗。應選富含脂肪的種子，以花生種子為最好，實驗前一般要浸泡3~4小時(也可用蓖麻種子)。

3、做蛋白質的鑒定實驗，可用富含蛋白質的黃豆或雞蛋清。

三、實驗注意事項

1、可溶性糖的鑒定

a.應將組成斐林試劑的甲液、乙液分別配制、儲存，使用前才將甲、乙液等量混勻成斐林試劑;斐林試劑很不穩定，甲、乙液混合保存時，生成的Cu ( OH ) 2在70~900C下分解成黑色CuO和水;

b. 切勿將甲液、乙液分別加入蘋果組織樣液中進行檢測。甲、乙液分別加入時可能會與組織樣液發生反應，無Cu ( OH ) 2生成。

2、蛋白質的鑒定

a. A液和B液也要分開配制，儲存。鑒定時先加A液后加B液;先加NaOH溶液，為Cu2+與蛋白質反應提供一個堿性的環境。A、B液混裝或同時加入，會導致Cu2+變成Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。

b、CuSO4溶液不能多加;否則CuSO4的藍色會遮蓋反應的真實顏色。

c. 蛋清要先稀釋;如果稀釋不夠，在實驗中蛋清粘在試管壁，與雙縮脲試劑反應后會粘固在試管內壁上，使反應不容易徹底，并且試管也不易洗干凈。

3、斐林試劑與雙縮脲試劑的區別：

斐林試劑

雙縮脲試劑

試劑成分

0.1g/mlNaOH溶液

0.1g/mlNaOH溶液（雙縮脲試劑A）

0.05g/mlCuSO4溶液

0.01g/mlCuSO4溶液（雙縮脲試劑B）

是否混合

混合后再滴加

先加雙縮脲試劑A后加雙縮脲試劑B

是否加熱

水浴加熱

不加熱

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實驗九：觀察DNA、RNA在細胞中的分布(必修一P26)

實驗原理：

1.甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和RNA的親和力不同，甲基綠使DNA呈現綠色，吡羅紅使RNA呈現紅色。利用甲基綠、吡羅紅混合染色劑將細胞染色，可以顯示DNA和RNA在細胞中的分布。

2.鹽酸能夠改變細胞膜的通透性，加速染色劑進入細胞，同時使染色體中的DNA和蛋白質分離，有利于DNA與染色劑結合。

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實驗十：用高倍顯微鏡觀察線粒體和葉綠體(必修一P47)

一 實驗原理：

1.葉綠體的辨認依據：葉綠體是綠色的，呈扁平的橢圓球形或球形。

2.線粒體辨認依據：線粒體的形態多樣，有短棒狀、圓球狀、線形、啞鈴形等。

3.健那綠染液是專一性染線粒體的活細胞染料，可以使活細胞中線粒體呈現藍綠色

二 實驗材料：

觀察葉綠體時選用：蘚類的葉、黑藻的葉。取這些材料的原因是：葉子薄而小，葉綠體清楚，可取整個小葉直接制片，所以作為實驗的首選材料。

若用菠菜葉作實驗材料，要取菠菜葉的下表皮并稍帶些葉肉。因為表皮細胞不含葉綠體。

三 討論

1、細胞質基質中的葉綠體，是不是靜止不動的?為什么?

答：不是。呈橢球體形的葉綠體在不同光照條件下可以運動，這種運動能隨時改變橢球體的方向，使葉綠體既能接受較多光照，又不至于被強光灼傷。

2、葉綠體的形態和分布，與葉綠體的功能有什么關系?

答：葉綠體的形態和分布都有利于接受光照，完成光合作用。如葉綠體在不同光照條件下改變方向。又如葉子上面的葉肉細胞中的葉綠體比下面的多，這可以接受更多的光照。

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實驗十一 觀察植物細胞的吸水和失水(必修一P61“探究”)

一 實驗原理：

1.質壁分離的原理：當細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時，細胞就會通過滲透作用而失水，細胞液中的水分就透過原生質層進入到溶液中，使細胞壁和原生質層都出現一定程度的收縮。由于原生質層比細胞壁的收縮性大，當細胞不斷失水時，原生質層就會與細胞壁分離。

2.質壁分離復原的原理：當細胞液的濃度大于外界溶液的濃度時，細胞就會通過滲透作用而吸水，外界溶液中的水分就通過原生質層進入到細胞液中，整個原生質層就會慢慢地恢復成原來的狀態，緊貼細胞壁，使植物細胞逐漸發生質壁分離復原。

二 實驗材料和方法：

紫色洋蔥鱗片葉的外表皮。因為液泡呈紫色，易于觀察。也可用水綿代替。0.3g/ml的蔗糖溶液。用蔗糖溶液做質壁分離劑對細胞無毒害作用。

質壁分離的方法(引流法)：制作洋蔥鱗片葉外表皮的臨時裝片。然后，從蓋玻片的一側滴入0.3g/ml的蔗糖溶液，在蓋玻片的另一側用吸水紙吸引。這樣重復幾次即可。

質壁分離復原的方法：改用清水實驗。

三 討論

1.如果將上述表皮細胞浸潤在與細胞液濃度相同的蔗糖溶液中，這些表皮細胞會出現什么現象?答：表皮細胞維持原狀，因為細胞液的濃度與外界溶液濃度相等。

2.當紅細胞細胞膜兩側的溶液具有濃度差時，紅細胞會不會發生質壁分離?為什么?

答：不會。因為紅細胞不具細胞壁。